مهار بیان ژن GFP به وسیله تداخل RNA (RNAi) در دودمان سلولی کارسینومای جنینی P19

author

Abstract:

 Introduction: RNA interference (RNAi) is a phenomenon of gene silencing that uses double-stranded RNA (dsRNA), specifically inhibits gene expression by degrading mRNA efficiently. The mediators of degradation are 21- to 23-nt small interfering RNAs (siRNA). The use of siRNAs as inhibitors of gene expression has been shown to be an effective way of studying gene function in mammalian cells.  Aim: To investigate the efficiency of siRNAs to eGFP gene silencing in P19 embryonal carcinoma (EC) stem cell.  Materials & Methods: Here, we used a vector-based siRNA expression system, pSUPER that can induce RNAi in mammalian cells (P19 line of murine embryonal carcinoma stem cell). The vector containing a small hairpin RNA (shRNA) to target exogenous reporter gene, enhanced green fluorescent protein (eGFP). The expression of eGFP in the cells was detected by using fluorescent microscopy and flow cytometry. Results: Using eGFP as a reporter system, we show here that a short hairpin RNA (shRNA) expression vector can specifically inhibit gene expression. Ttransfection of the plasmid into P19 cells significantly decreased the number of eGFP-expressing cells and overall eGFP fluorescence. The RNA interfering effect was successfully observed in both transient and stable transfected cells.  Conclusion: The results indicate that use of hairpin siRNA expressing vectors for RNAi is a promising method to inhibition of gene expression in mammalian cells.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

مهار بیان ژن gfp به وسیله تداخل rna (rnai) در دودمان سلولی کارسینومای جنینی p۱۹

مقدمه: تداخل ( rnai) rna نوعی پدیده خاموشی ژن است که در آن rna دو رشته ای ( dsrna ) با تخریب مؤثر mrna به طور اختصاصی، از بیان ژن جلوگیری می کند. واسطه این تخریب، rna های تداخل گر کوچک ( sirna) 21-23 نوکلئوتیدی هستند. نشان داده شده است که استفاده از sirna به عنوان ممانعت کننده بیان ژن، روشی مؤثر برای مطالعه عملکرد ژن در سلول های پستانداران است.   هدف: بررسی قابلیت sirna برای خاموشی ژن egfp در س...

full text

بررسی مهار بیان ژن رپرسور گاماگلوبین با روش RNAi در رده سلولی اریتروئیدی 562 K با هدف ژن درمانی بتاتالاسمی

سابقه و هدف: بتاتالاسمی از بیماریهای ژنتیکی است که سبب کم‌خونی حاد در افراد مبتلا می‌شود. یکی از روشهای درمان بتاتالاسمی، القای ژن گاماگلوبین جنینی است. کمپلکس پروتئینی DRED از رپرسورهای گاماگلوبین است که از دو زیر واحد متصل شونده به DNA، به نام 2 TRو 4TR تشکیل شده است. یک روش جالب جهت افزایش بیان گاماگلوبین، مهار بیان 4TR توسط مولکول‌های siRNA می‌باشد. هدف از این تحقیق، راه‌اندازی سیستم RNAi ب...

full text

مهار بیان ژن نوکلئوستمین در رده سلولی سرطانی مثانه با واسطه استراتژی rnai

هدف: نوکلئوستمین جزء خانواده ای از پروتئین های هستکی است که به میزان زیادی در سلول های بنیادین جنینی، عصبی و مزانشیمی بیان می شود و در تنظیم خودبازسازی این سلول ها نقش دارد. بیش بیان این ژن در رده های سلولی سرطانی متعدد و نیز بافت های توموری چون تومورهای معده، کبد و پروستات نشان داده شده است. هدف از مطالعه حاضر، بررسی آثار سرکوب بیان این ژن در رده سلولی سرطانی مثانه با روش rnai است. مواد و روش ...

full text

تمایز عصبی سلول های کار سینومای جنینی P19 بیان کننده ی ژن پروتئین فلوئورسانت سبز به وسیله داروی ضد پارکینسونی دپرنیل

زمینه و هدف: سلول های P19 دودمانی از سلول های کار سینومای جنینی چند استعدادی هستند که قادرند در محیط کشت حاوی سرم رشد نموده و برای تمایز به هر سه دودمان مزودرمی، آندودرمی و اکتودرمی القا شوند. با استفاده از روش های استاندارد ترانسفکشن می توان توالی DNA خارجی را به این سلول ها وارد کرده و عملکرد و تمایز سلولی را بررسی کرد. این تحقیق با هدف القای فنوتیپ عصبی در سلول های P19 ترانسفکت شده با ژن پرو...

full text

بررسی مهار بیان ژن رپرسور گاماگلوبین با روش rnai در رده سلولی اریتروئیدی ۵۶۲ k با هدف ژن درمانی بتاتالاسمی

سابقه و هدف: بتاتالاسمی از بیماریهای ژنتیکی است که سبب کم خونی حاد در افراد مبتلا می شود. یکی از روشهای درمان بتاتالاسمی، القای ژن گاماگلوبین جنینی است. کمپلکس پروتئینی dred از رپرسورهای گاماگلوبین است که از دو زیر واحد متصل شونده به dna، به نام 2 trو 4tr تشکیل شده است. یک روش جالب جهت افزایش بیان گاماگلوبین، مهار بیان 4tr توسط مولکول های sirna می باشد. هدف از این تحقیق، راه اندازی سیستم rnai ب...

full text

بررسی الگوی بیان boris طی تمایز سلول های کارسینومای شبه جنینی p19 با رتینوئیک اسید

boris/ctcfl پروتئینی است که در ساختار آن حاوی 11 موتیف(motif) انگشت روی (zinc finger) می باشد و به عنوان پارالوگ (paralogue) ctcf شناخته شده است. ctcf پروتئینی است که در همه بافت ها بیان می شود و در بیان ژن ها و سازمان دهی کروماتین نقش های متنوعی دارد. برخی محققان معتقد هستند که بیان boris به بافت بیضه طبیعی، سلول های سرطانی و پرتوان محدود شده است، بنابراین boris را به عنوان یک ژن سرطانی- بیضه ...

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 16  issue 78

pages  5- 10

publication date 2009-01

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023